液相色譜技術在基因雜質(zhì)分析中的重要作用
高效液相色譜技術(HPLC) HPLC 作為最傳統(tǒng)的方法在雜質(zhì)分離中仍然使用得最多。
通過各種色譜柱技術以及聯(lián)用技術能夠對絕大多數(shù)化合物實現(xiàn)分離、分析。
為了解決與紫外檢測器聯(lián)用靈敏度低的問題，新型二維 高 效 液 相 色 譜 (2D-HPLC)利用了液相色譜技術分離和富集的特點提高了對低濃度雜質(zhì)的檢測能力。
目前，HPLC 無論采用正相洗脫還是反相洗脫都需消耗大量的有機溶劑，這對環(huán)境帶來較大的污染，因此提出以水或其他環(huán)境友好的試劑為主要洗脫溶劑的新型液相色譜技術正得到廣泛的研究。
超高效液相色譜技術(UHPLC) 為了應對藥物研發(fā)的需要，UHPLC 作為一種快速分離的色譜技術已經(jīng)出現(xiàn)在各種藥物的開發(fā)上。
根據(jù)UHPLC 的使用方法，討論了如何針對不同樣品建立穩(wěn)定的 UHPLC 方法。
手性分離方面，UHPLC目前并沒有大量小于2 μm 粒徑的商品化手性色譜柱，但是利用傳統(tǒng)的手性流動相添加法也可實現(xiàn)對手性雜質(zhì)進行分離。
在實驗室建設方面，分析實驗室目前仍以 HPLC 為主要研究儀器，但為了獲得類似于UHPLC 分離效能，許多科研工作者通過優(yōu)化 HPLC系統(tǒng)同時使用核殼型色譜柱實現(xiàn)了快速分離。
以液態(tài)CO2 為主要流動相的SFC 技術，由于其與紫外聯(lián)用檢測靈敏度低，其發(fā)展一直非常緩慢，但質(zhì)譜檢測器(MS)的普及以及環(huán)境友好型社會的需要，使 SFC 能用于分離手性雜質(zhì)。
雖然 SFC 與質(zhì)譜聯(lián)用技術用于雜質(zhì)分析已有相關報道 ，但商品化的 SFC-MS聯(lián)用儀器并未大量出現(xiàn)。
為實現(xiàn)對雜質(zhì)的定量及定性分析，需要獲取高純度單一成分的雜質(zhì)，然而雜質(zhì)在藥物中含量較低，利用分析型液相色譜技術制備雜質(zhì)需要消耗大量時間，利用制備型液相色譜技術等方法可提高高純度雜質(zhì)的獲取速度，加快雜質(zhì)研究工作。經(jīng)純化的雜質(zhì)可獲得更高質(zhì)量的圖譜，但藥物中雜質(zhì)含量低的問題一直制約著雜質(zhì)單體的獲取速度。
利用液質(zhì)聯(lián)用方法可獲得雜質(zhì)的來源與簡單結構，再利用強制降解 、結晶母液或直接合成等方式可制備出雜質(zhì)單體制備技術上。
為了克服常規(guī)一維制備型液相色譜技術以及制備型SFC 色譜技術的方法建立困難、制備時間較長等缺點而提出制備型的二維液相色譜技術(Prep 2D-LC)以及二維 SFC 色譜技術已得到越來越多的應用。一種新型的 Prep 2D-LC，該儀器首先通過一維液相色譜對樣品進行初步分離，并用質(zhì)譜相對分子質(zhì)量監(jiān)控和中心切割的方式將目標物保存在樣品環(huán)(Sample loop)中，再利用在柱洗脫(at column dilution)的方法將樣品環(huán)中的樣品進樣至第二維液相色譜中，第二維液相色譜通過使用與第一維相同或者不同的流動相對樣品進行進一步分離同時使用質(zhì)譜監(jiān)控方法即可得到更高純度的目標物。這種新方法不僅替代了一維制備型液相色譜，同時解決了傳統(tǒng)制備2D-LC 系統(tǒng)高壓以及峰展寬的問題。
